Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 1

Bolsista: SAMARA SILVA ANDRADE
Orientador(a): Osvaldo Pompilio de Melo Neto
Coorientador(a): Rafaela Mikaella Arruda Martins da Silva
Resumo: JUSTIFICATIVA E RELEVÂNCIA Este subprojeto faz parte de um projeto que tem como objetivo maior estudar o processo de síntese de proteínas, ou tradução, nos tripanosomatídeos, protozoários flagelados causadores de diferentes enfermidades de impacto, como as leishmanioses [1]. Estes parasitas se destacam por apresentarem uma série de características únicas em processos ligados à sua expressão gênica e mecanismos de regulação [2]. O foco da pesquisa é o estudo de complexos do tipo eIF4F de iniciação da tradução. Em outros eucariotos o complexo eIF4F tem como função principal o reconhecimento dos mRNAs eucarióticos, e seu recrutamento para a tradução [3]. A equipe responsável pelo projeto atuou na descrição em “Leishmania” de múltiplos homólogos de subunidades deste complexo, formando um mínimo de cinco complexos e indicando uma complexidade na tradução não observada em outros organismos [4]. Contudo a participação destes complexos em eventos ligados a diferenciação celular nestes patógenos, críticos para sua sobrevivência em diferentes hospedeiros e condições ambientais e para sua patogenicidade, ainda precisa ser melhor investigada. Neste projeto, soros policlonais, proteínas recombinantes e inúmeras construções gênicas vêm sendo utilizados, associados a ferramentas bioquímicas e de biologia molecular de ponta. Diferentes espécies de Leishmania (como L. infantum, L. amazonensis, L. tarentolae e L. braziliensis) são alvos do estudo, tendo em vista seu impacto na saúde pública do Brasil. Contudo, para se investigar processos de diferenciação celular, são necessárias linhagens passíveis de serem cultivadas em diferentes formas de vida, cuja diferenciação precisa ser monitorada de acordo com o padrão de expressão de marcadores proteicos estágio-específicos. Entretanto, existe uma lacuna de ferramentas disponíveis para se avaliar a expressão desses marcadores, como soros policlonais específicos. Este subprojeto almeja então apoiar o esforço de produção de soros capazes de avaliar a expressão de marcadores proteicos estágios específicos em diferentes espécies de Leishmania. O foco desse trabalho serão as proteínas HASP, preferencialmente, e SHERP, de duas ou mais espécies de Leishmania. [5] OBJETIVOS Geral Produzir soro policlonal específico e avaliar a expressão em “Escherichia coli” de antígenos expressos de forma estágio específica em espécies distintas de “Leishmania”. Específicos a) Amplificar e clonar, em vetores plasmidiais de expressão, genes codificantes da proteína HASP e/ou SHERP de ao menos duas espécies distintas de “Leishmania”, “L. braziliensis” e “L. amazonensis”. b) Expressar e purificar as respectivas proteínas recombinantes em “Escherichia coli” e realizar a sua purificação por cromatografia de afinidade; b) Produzir soros em coelho contra as proteínas recombinantes; c) Purificar os anticorpos obtidos, verificar a sua especificidade e avaliar a expressão das respectivas proteínas em fases diferentes de cultivo de diferentes espécies de “Leishmania”. METODOLOGIA Os DNAs codificantes das proteínas de interesses serão amplificados e clonados em vetores de clonagem e expressão. Em seguida será feita a transformação e expressão das proteínas recombinantes em E. coli. Será realizada a produção em larga escala da proteína recombinante e depois a purificação proteica através de resina Ni-NTA Agarose (Qiagen). Em seguida serão obtidos soros policlonais através da imunização de coelhos e anticorpos específicos purificados por imunoadsorção. Por fim, os anticorpos serão utilizados em ensaios de western blot contra as proteínas recombinantes e/ou extratos de parasitas. REFERÊNCIAS [1] LUKEŠ, J. et al. Trends in Parasitology, v. 34, n. 6, p. 466–480, jun. 2018. [2] CLAYTON, C. Open Biology, v. 9, n. 6, 2019. [3] MERRICK, W. C. Journal of Biological Chemistry, v. 290, n. 40, p. 24091–24099, 2015. [4] FREIRE, E. et al. Pathogens, v. 6, n. 4, p. 55, 2017. [5] SÁDLOVÁ, J. et al. Cellular Microbiology, v. 12, n. 12, p. 1765–1779, dez. 2010.

Bolsista: CLAUDIA GABRIELLE SANTOS DE ABREU
Orientador(a): MONICA MARIA CRESPO COSTA
Coorientador(a): Elisama Helvecio
Resumo: INTRODUÇÃO/JUSTIFICATIVA: os Arbovírus são um problema de saúde mundial, causando doenças que têm desencadeado complicações graves ao homem. A fragilidade no controle de seus vetores pode ter contribuído para a disseminação de arbovírus no Brasil, como o Zika (ZIKV), com consequências traduzidas no diagnóstico de microcefalia em recém-nascidos. Espécies de Aedes são as principais incriminadas na transmissão do ZIKV, mas outras podem ter papel secundário nesse processo, como o Culex quinquefasciatus, vetor de outros patógenos, predominante nas Américas e apontado como vetor potencial do ZIKV. A capacidade vetorial para transmitir um patógeno vai além da competência vetorial, que é intrínseca ao vetor, e a ela estão associados fatores ambientais, de comportamento e do desempenho biológico, que devem ser considerados nas investigações em diferentes contextos epidemiológicos, pois esses podem alterar a estimativa de ocorrência e dimensão de um surto. São escassos os estudos sobre a capacidade vetorial de Cx. quinquefasciatus em relação ao ZIKV, o que deixa lacunas no conhecimento sobre sua dinâmica de transmissão, sobretudo em Pernambuco, onde essa espécie apresenta alta antropofilia e abundância. Os resultados deste estudo poderão subsidiar gestores no controle populacional de espécies envolvidas na transmissão do ZIKV, contribuindo para saúde, especialmente da população residente em áreas com infraestrutura sanitária precária. OBJETIVOS: avaliar a capacidade reprodutiva, incluindo fecundidade e fertilidade, bem como a busca por fonte sanguínea e transmissão vertical de colônia de Cx. quinquefasciatus de laboratório (colônia CqSLab), após exposição ao ZIKV, em fêmeas expostas e em seus descendentes (geração F1). METODOLOGIA: o ZIKV é da linhagem ZIKV BRPE243/2015 e foi cedido pelo Laboratório de Virologia e Terapia Experimental (LAVITE) do IAM. A colônia CqSLab foi fundada em 2011, originou-se da Região Metropolitana do Recife e é mantida no insetário do Dept. de Entomologia do IAM, em condições ambientais controladas. A exposição dos mosquitos ao ZIKV, através de alimentação sanguínea artificial, é realizada no infectório do IAM, obedecendo-se as normas internacionais de biossegurança. Após a exposição, fêmeas de cada grupo são transferidas para gaiolas individuais, onde são colocados recipientes de postura para obtenção dos ovos. Estes são contados e colocados para eclosão das larvas, a fim de determinar a fecundidade e fertilidade. As larvas que eclodiram são contadas e colocadas em cubas de criação para a obtenção de mosquitos da geração subsequente (F1) e posterior avaliação da transmissão vertical, busca por fonte sanguínea, fecundidade e fertilidade desses descendentes. Ao final de cada etapa do experimento, as fêmeas são coletadas e armazenadas a -80°C, para extração de RNA e posterior confirmação da infecção por qRT-PCR. Na análise estatística, está sendo utilizado Teste t, com correção de Welch's. As conclusões são tomadas ao nível de significância de 5%. A apresentação das variáveis é feita por meio de gráficos e tabelas. RESULTADOS PRELIMINARES: os dados obtidos até o momento, mostram que a exposição ao ZIKV reduziu a fecundidade (p=0,0003) e fertilidade (p=0,0118) entre as fêmeas expostas, mas não entre aquelas da geração subseqüente (F1). Por outro lado, o percentual de busca por fonte sanguínea, em F1, foi significativamente menor (p< 0,0117) entre as descendentes de fêmeas expostas ao ZIKV, com relação às não expostas. Os resultados preliminares aqui apresentados ainda não são conclusivos, sendo necessário mais um ou dois experimentos para obtenção de resultados mais robustos. Este estudo poderá contribuir para a definição de métodos de controle populacionais mais eficazes, de modo a potencializar o provável custo biológico causado em Culex quinquefasciatus, pela exposição ao ZIKV.

Bolsista: MARIANA BRAGA RODRIGUES
Orientador(a): LIZANKA PAOLA FIGUEIREDO MARINHEIRO
Coorientador(a): AMANDA OLIVEIRA DE CARVALHO
Resumo: O envelhecimento populacional é um fenômeno natural, irreversível e mundial. Dados estatísticos demonstram que, a população mundial cresce vertiginosamente e o tempo de vida médio segue aumentando de forma significativa durante as últimas décadas, em todo o mundo. No Brasil, segundo dados do último Censo demográfico para população idosa brasileira, o alargamento do topo da pirâmide etária pode ser observado pelo crescimento da participação relativa da população com 65 anos ou mais, que era de 4,8% em 1991, passando a 5,9% em 2000 e chegando a 7,4% em 2010. Especificamente as regiões sudeste e sul apresentam evolução semelhante da estrutura etária, mantendo-se como as duas regiões mais envelhecidas do País. O crescimento mais dramático da população idosa está no grupo mais velho, em 2019, a expectativa de vida passou a 76,6 anos, sendo de 73,1 para homens e 80,1 anos para mulheres. Isso se deve, em alguma medida, à implementação de ações higienistas, aos avanços tecnológicos e no campo da saúde, bem como ao aumento da oferta de alimentos. Por outro lado, o envelhecimento populacional trouxe um novo perfil de morbimortalidade, caracterizado por um aumento de doenças crônico-degenerativas (PEREIRA ET AL, 2015; JARDIM & JARDIM,2021). Diante dessa expansão do envelhecimento, a Organização Mundial da Saúde viu - se convocada a priorizar a discussão do mesmo em sua agenda e, em consequência, um novo conceito nos foi ofertado - o envelhecimento ativo, o qual podemos compreender como uma forma de potencializar a saúde, participação e segurança dos indivíduos, objetivando a melhoria da qualidade de vida à medida que estes envelhecem (SOARES ET AL,2018). Com isso, verificamos a dupla faceta do fenômeno do envelhecimento populacional - a da conquista, por representar aumento da longevidade, e a da responsabilização, tanto dos gestores públicos quanto do corpo social, que implica o desenvolvimento de mecanismos que proporcionem uma vida ativa com independência, autonomia e qualidade nesse período (VEGI ET AL,2020). Nesse contexto, faz- se necessário, nos atentarmos para os desafios advindos do processo de envelhecimento e da velhice a fim de torná- lo equilibrado e saudável (SILVA & EULÁLIO,2021). Quando olhamos para esse movimento acelerado de envelhecimento populacional, observa-se que, no que diz respeito às mulheres, há um acompanhamento diretamente proporcional da experiência do climatério, pois o processo de envelhecimento feminino, não se faz desvinculado de tal período transicional, em que se podem ocorrer alterações físicas,hormonais, metabólicas, somáticas, psíquicas e sociais (ZAMPIERI,2009, PEREIRA, ET AL,2016). Assim, como as mulheres possuem, atualmente, uma expectativa de vida de 80,1 anos e vivem um terço dela acima dos 50 anos (ZAMPIERI,2009), bem como pelo menos 4,5 anos mais que homens (SOARES ET AL,2018), temos, em decorrência, uma elevação considerável da experiência do climatério.Nesse ínterim, verifica- se, a partir da análise do envelhecimento feminino, a necessidade de uma atenção específica e integral a esse fenômeno para que as mulheres tenham melhor qualidade de vida na velhice. Em contrapartida, quando examinamos o histórico das políticas públicas de saúde da mulher, verificamos que há um número ínfimo de atividades voltadas para a promoção da saúde no climatério, tendo em vista que, na prática, os esforços estão concentrados na melhoria dos indicadores epidemiológicos, como a mortalidade materno-infantil, tornando assim a assistência às mulheres climatéricas ancorada no processo saúde- doença e medicalização do corpo (SOARES ET AL,2018, LUZ & FRUTUOSA,2021) e não no conceito ampliado de saúde, o qual inclui a promoção e prevenção .Diante disso, faz-se necessário, introduzir no cuidado feminino momentos da vida da mulher que foram historicamente cerceados com vistas a criação de caminhos para uma assistência mais abrangente, ou seja, que incluam as reais necessidades do corpo feminimo, articulando práticas atencionais e preventivas que abarquem os princípios de se envelhecer ativamente a fim de promover a melhoria da qualidade e expectativa de vida do grupo feminimo (SOARES ET AL,2018,LUZ & FRUTUOSA,2021). Face ao exposto, entendemos ser pertinente avaliar o climatério para além da sintomatologia clínica da menopausa com vistas à promoção do envelhecimento ativo e satisfatório,uma vez que experienciar do climatério de forma deleitosa é primordial para obter-se um processo de envelhecimento e velhice saudáveis (SOARES ET AL,2018). Nesse contexto, ressalta-se a importância de pensar em práticas de cuidado integral à mulher, que considerem a complexidade desse período transicional e suas implicações no processo de envelhecimento feminino. Essa pauta é ainda mais urgente considerando o panorama atual: invisibilidade histórica desse fenômeno na assistência à mulher; as problemáticas do cuidado à saúde da mulher à luz de uma sociedade patriarcal; e a precarização e esgarçamento do sistema único de saúde - somados ainda a um período de intensificação dessa fragilidade em decorrência da pandemia de covid 19, a qual torna a oferta e acesso aos dispositivos de saúde ainda mais limitados (FERREIRA ET AL,2020, LUZ & FRUTUOSA,2021). OBJETIVO GERAL Realizar estudo retrospectivo dos principais dados referentes ao envelhecimento e à saúde da mulher, obtidos através da produção científica realizada pelo Instituto Fernandes Figueira, sob o projeto guarda-chuva “Envelhecimento da mulher: estudo das comorbidades de maior prevalência da mulher na pós menopausa visando um envelhecimento com melhor qualidade de vida”, em seus mais de 10 anos de produção.

Bolsista: Anelise Navi de Lima
Orientador(a): MARINA CAMPOS ARAUJO
Coorientador(a): Não informado
Resumo: Os problemas mais relevantes envolvendo nutrição e alimentação sobrevêm do excesso ou da carência de determinados nutrientes, em especial entre crianças em idade escolar, se tratando de uma fase importante na construção de hábitos alimentares saudáveis e na formação da saúde do indivíduo quando adulto. Com o entendimento da importância da avaliação nutricional na infância para medidas corretivas e de prevenção, foi desenvolvido o aplicativo CADE, Consumo Alimentar no Domicílio e na Escola. O aplicativo trata-se de uma ferramenta tecnológica desenvolvida para capturar informações dietéticas globais de crianças de 4 a 9 anos de idade de diversas regiões do país, considerando a alimentação qualitativa e quantitativa. Torna-se importante a estrutura e funcionamento do aplicativo antes de sua aplicação para execução correta da avaliação nutricional, sendo assim, a análise da usabilidade do aplicativo é importante passo antes da execução do aplicativo, pois permite detalhar as respostas referentes à capacidade dos usuários finais, perante o uso de um software. O objetivo do projeto é analisar a usabilidade do aplicativo CADE para avaliação do consumo alimentar de crianças em idade escolar, segundo a percepção dos usuários finais. Será utilizada uma amostra por conveniência de 50 pais/responsáveis pelos alunos, que serão os usuários do ambiente domiciliar, e 50 professores, que serão os usuários do ambiente escolar. Trata-se de um estudo transversal e que ocorrerá nas Unidades Escolares do município de Niterói, que fica localizado na região metropolitana do Rio de Janeiro. O aplicativo CADE é um aplicativo online para dispositivos móveis, disponível na plataforma Android e pode ser acessado pelos usuários finais que são os responsáveis pelas crianças no ambiente escolar e domiciliar. As etapas de participação no estudo serão as seguintes: aceite no TCLE; assistir a um vídeo explicativo para cada ambiente do aplicativo; preencher as informações dietéticas da criança, como perguntas gerais sobre a alimentação; detalhar os itens alimentares relatados; revisar; aplicar um questionário de identificação do usuário; avaliar a usabilidade do CADE, por meio do preenchimento do System Usability Scale (SUS).

Bolsista: GUILHERME HENRIQUE RODRIGUES MATTOS
Orientador(a): Luzia Helena Carvalho
Coorientador(a): GABRIELA MAIA FERNANDES
Resumo: A invasão dos eritrócitos pelos parasitos da malária garante o sucesso da infecção humana e, consequentemente, o desenvolvimento da doença clínica. Para que o merozoíto do P. vivax consiga sucesso nesse processo de invasão é necessária a interação entre a região II da Duffy binding protein (DBPII) e seu receptor presente na superfície dos eritrócitos, o antígeno de grupo sanguíneo Duffy receptor para quimiocinas (DARC). Logo, indivíduos que não apresentam o DARC em seus eritrócitos são altamente resistentes à infecção pelo P. vivax. Entretanto, estudos recentes demonstraram alguns indivíduos DARC negativos infectados por este parasito, o que sugere uma via alternativa de invasão ainda desconhecida. Neste contexto, o presente estudo visa caracterizar molecularmente uma proteína recém descrita do P. vivax, denominada proteína de ligação ao eritrócito 2 (EBP2), que compartilha domínios chave com a DBPII. A nossa hipótese aqui é a de que esta proteína pode participar na invasão do P. vivax em eritrócitos DARC negativos. DNAs provenientes de pacientes infectados com o P. vivax, de várias regiões do Brasil (Amapá, Amazonas, Mato Grosso, Rondônia e Pará) foram utilizados como molde para amplificar o gene da EBP2 e da DBPII por meio da técnica de Semi-Nested PCR e PCR convencional, respectivamente. As amostras amplificadas foram purificadas por meio da enzima ExoSAP-IT, dosadas no nanodrop e, aquelas com uma concentração de pelo menos 50 ng/uL foram utilizadas para o sequenciamento de Sanger. As sequências foram analisadas e comparadas com a sequência referência disponível no GenBank (acesso em ebp: K987954.1; dbp: M61095.1) para identificação de possíveis polimorfismos nos genes da EBP2 e da DBPII. Até o presente momento 10 amostras foram amplificadas, nas quais foram identificados 13 polimorfismos não-sinônimos para o gene da EBP2 e 17 para a DBPII. Os resultados iniciais sugerem que o gene da EBP2 é menos polimórfico que o da DBPII. Visando aumentar o número de amostras, já iniciamos o sequenciamento de cerca de 20 amostras, incluindo de diferentes áreas geográficas. Este estudo da variabilidade genética da EBP2 é pioneiro no nosso meio e poderá fornecer os subsídios para validar vacinas que visam proteínas menos polimórficas.

Bolsista: Tatiana Daudt Pereira Vieira
Orientador(a): LUCIMAR FERREIRA KNEIPP
Coorientador(a): INGRID DE SOUZA E SOUSA
Resumo: A feohifomicose (FHM) é uma infecção fúngica crônica, recorrente e de difícil tratamento com crescentes relatos de resistência aos fármacos disponíveis. Neste contexto, estudos para testes de novos compostos bioativos são essenciais. No presente projeto pretendemos avaliar o efeito de derivados de 1,10-fenantrolina sobre Exophiala dermatitidis, o principal agente da FHM, e seus atributos de virulência. Existem relatos na literatura que apontam que compostos de coordenação metálicos são alvos em potencial para o tratamento alternativo de infecções fúngicas. Os resultados obtidos no presente projeto revelaram que o derivado de 1,10 fenantrolina livre de metal, o fendio, e os derivados metálicos complexados ao sal perclorato ([Ag(fendio)2]ClO4 e [Cu(fendio)3](ClO4)2.4H2O) apresentaram boa atividade antimicrobiana, uma vez que todos foram capazes de inibir o crescimento de E. dermatitidis com CIMs iguais a 12,5; 1,56 e 3,12 microM, respectivamente. O estudo também avaliou a susceptibilidade de E. dermatitidis aos derivados de 1,10-fenantrolina durante a formação de biofilme, que são estruturas envolvidas com virulência e resistência microbiana. Considerando a importância da terapia conjugada, que apresenta como principal vantagem aumentar a eficácia e reduzir a toxidez e resistência microbiana, neste este ensaio o tratamento foi realizado utilizando concentrações subinibitórias dos derivados isoladamente ou em associação com o antifúngico clássico anfotericina B (AMB). Os dados indicaram que a viabilidade das células durante a formação do biofilme de E. dermatitidis foi reduzida ~30% após tratamento com AMB combinada ao composto de Cu(II). A ação dos compostos foi avaliada também sobre um outro atributo de virulência, a capacidade do fungo em mudar da forma de conídio para a forma filamentosa. Para este ensaio os fungos foram tratados com concentrações não inibitórias dos compostos e a filamentação avaliada por microscopia de luz. O sistema tratado com o composto de Cu(II) na concentração de ½×CIM apresentou majoritariamente pseudohifas e alguns conídios, mostrando que ocorreu uma forte inibição da filamentação fúngica quando comparada ao controle. O derivado de Ag(I) também inibiu, mas em relação ao composto de Cu(II) foi menos efetivo. Com o objetivo de investigar se a ação dos compostos tem relação com o estresse oxidativo, a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) foi avaliada. Nas condições testadas, os dados revelaram que somente o composto de Cu(II), na concentração não inibitória (16×MIC), foi capaz de produzir EROs. Esta indução foi confirmada após o tratamento com o antioxidante, N-acetil cisteína (NAC) que inibiu drasticamente a produção de EROs pelo composto. Outros experimentos estão em andamento no laboratório para cumprir os objetivos propostos no projeto.