Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 2

Bolsista: RAFAELA CAROLINE LECHTCHECHEN BALDUINO
Orientador(a): SHEILA CRISTINA NARDELLI
Resumo: O Toxoplasma gondii é o agente etiológico da toxoplasmose, uma doença cosmopolita e negligenciada que atinge cerca de ¼ da população mundial, sendo considerada a infecção parasitária mais comum em humanos. No Brasil, essa doença varia de 20-60%, de incidência, dependendo da região, das condições socioeconômicas e culturais. Vale destacar ainda, que no Brasil, os pacientes desenvolvem sintomas mais severos comparados aos indivíduos do Hemisfério Norte, provavelmente devido a uma maior variabilidade genética e maior virulência dos isolados brasileitos. A toxoplasmose é extremamente perigosa quando adquirida durante a gravidez, ou em pacientes imunocomprometidos, podendo resultar em danos severos como malformações congênitas e encefalia. Embora considerada geralmente assintomática em pacientes imunocompetentes, a doença em sua fase crônica tem sido recentemente associada a alterações neurológicas e comportamentais, ressaltando a importância de identificar alvos para o tratamento mais eficiente da toxoplasmose. Nesse contexto, a pesquisa básica focada em componentes essenciais a sobrevivência do parasita, poderia contribuir não somente na compreensão da biologia do parasita, mas também resultar em tratamentos e diagnósticos mais eficientes. Nosso grupo tem focado no estudo das desacetilases de histonas, pelo papel dessas enzimas no silenciamento de genes essenciais para diversos processos do parasita, como virulência, diferenciação e proliferação. As HDACs apresentam uma forte correlação com diversas doenças, incluindo câncer e doenças degenerativas, como Alzheimer. De modo geral, células cancerígenas apresentam alta expressão de HDACs comparadas a células normais e diversos inibidores para essas proteínas têm sido testados com sucesso como tratamento alternativo a quimioterapia tradicional, afetando a proliferação celular, angiogênese, diferenciação e apoptose celular. Em parasitas Apicomplexa, a associação entre HDACs e as doenças por eles causadas foi obtida mais recentemente com a identificação de HDACs como alvo de dois compostos anti-protozoário, apicidina e FR235222, colocando os fatores epigenéticos no centro da busca por alvos quimioterápicos. Toxoplasma possui sete HDACs, com sequencias únicas a alguns membros do filo Apicomplexa. Esse dado ressalta a importância do estudo dessas enzimas, com alto potencial quimioterápico. Toxoplasma é um modelo de estudo que possui diversas ferramentas de genética reversa disponíveis e constantemente aprimoradas, incluindo a manipulação gênica via CRISPR-Cas9 e diversas metodologias para obtenção do nocaute, mesmo no caso de genes essenciais, e tem sido utilizadas com sucesso pelo nosso grupo. Além da manipulação genética, a manutenção e a diferenciação do parasita são relativamente triviais. Dados preliminares obtidos por nosso grupo, revelaram que TgHDAC4 é específica de parasitas Apicomplexa e está localizada no apicoplasto, considerada o “calcanhar de Aquiles” do Toxoplasma. Visto que o apicoplasto apresenta um genoma próprio, é provável que essa HDAC4 atua na manutenção do genoma dessa organela. Esse dado é particularmente interessante, considerando que essa organela é essencial a sobrevivência do parasita. Por outro lado, a TgHDAC2 parece atuar na replicação do DNA, uma vez que parasitas nocaute tem um problema na progressão da fase S, em comparação com o controle, o que resulta em problemas na proliferação e principalmente na virulência dos parasitas nocaute, que resulta em três vezes menos infecção in vitro. Esse projeto visa expandir a caracterização funcional para aTgHDAC5, obtendo seu etiquetamento para obtenção da localização celular. Das HDACs caracterizadas até o momento, apenas a TgHDAC3 está localizada no núcleo, e está envolvida com a regulação da expressão gênica durante a transição das formas taquizoítas para bradizoítas. Acreditamos que a identificação de outras HDACs nucleares podem auxiliar a desvendar o processo de regulação nesse parasita, proporcionando novas perspectivas e sem dúvida, auxiliando na identificação de novos alvos para terapia contra Toxoplasmose, doença de intensa relevância para Saúde Pública no Brasil.

Bolsista: BEATRIZ OLIVEIRA BARROS
Orientador(a): Naiara Cristina Clemente dos Santos Tavares de Paula
Resumo: Desde o início do século 20, as infecções virais transmitidas por artrópodes têm sido um grave problema global de saúde pública. Epidemias de febre amarela e dengue no Brasil, desde 1929 e 1981, respectivamente, têm sido enfrentadas há mais de 50 anos, e novas ameaças como CHIKV, ZIKV e WNV surgiram nas Américas nas últimas décadas. Recentemente, OROV e MAYV foram reportados na região da Amazônia e têm potencial para provocar graves epidemias no futuro. A OMS afirma que a vigilância, controle do vetor, testes diagnósticos, vacinas e terapias específicas são necessários para controlar as arboviroses emergentes e reemergentes. O Brasil tem sofrido com essas doenças, com 11,6 milhões de infecções e 7 mil óbitos relacionados à dengue, zika e chikungunya nos últimos dez anos, representando 91% das mortes. É crucial que sejam realizadas pesquisas científicas para gerar inovações e conhecimento sobre prevenção, controle, diagnóstico, prognóstico e tratamento de arboviroses, com o objetivo de reduzir seu impacto na população e melhorar a saúde pública do país. Além disso, é importante destacar que as Emergências em Saúde Pública podem afetar a capacidade de vigilância e resposta dos sistemas de saúde, principalmente em áreas com desastres naturais, comprometendo a detecção de arboviroses. A vigilância em saúde é um fator crucial para detectar e prevenir a disseminação de doenças e surtos epidêmicos. Portanto, o desenvolvimento de um diagnóstico multiplex com PCR quantitativa para vigilância epidemiológica de arboviroses em Minas Gerais é uma medida importante e inovadora. Esse projeto busca desenvolver um diagnóstico de alta sensibilidade e especificidade, que poderá ser útil na identificação rápida de arbovírus relevantes para a saúde pública, fornecendo informações valiosas para profissionais de saúde e permitindo o estabelecimento de medidas preventivas e a contenção de possíveis surtos epidêmicos. Para o desenvolvimento do diagnóstico multiplex, serão utilizados iniciadores específicos para cada arbovírus, que serão desenhados com base nas sequências preditas no NCBI. O RNA viral de cada arbovírus será extraído a partir de amostras clínicas de pacientes infectados, usando um kit específico. Em seguida, será realizada a síntese de cDNA para obtenção de molde para a amplificação por PCR. A amplificação do cDNA será realizada usando os iniciadores desenhados, em uma reação multiplex, que permitirá a detecção de múltiplos arbovírus em uma única reação. Os produtos de PCR provenientes da purificação serão inseridos no vetor pGEM(Marca Registrada) -T Easy, seguido de transformação em bactérias Escherichia coli cepa DH5Alpha, extração plasmidial e sequenciamento. A análise de sequência permitirá a confirmação da identidade dos arbovírus detectados. Será realizada a padronização da reação, definindo as temperaturas de anelamento, o número de ciclos e o tempo de amplificação para obtenção dos Cts. O protocolo da OMS para diagnóstico de Febre Amarela será utilizado como guia e adaptado para cada estudo de iniciadores. Os produtos de amplificação serão submetidos a uma corrida em gel de agarose e purificados. A eficiência dos iniciadores será determinada com a concentração gradiente. A sensibilidade será avaliada com diluições seriadas de plasmídeos e RNA viral, e a especificidade será avaliada em amostras clínicas. Os iniciadores com melhores resultados serão selecionados para a validação clínica em amostras de pacientes. Com base nos resultados obtidos por este estudo, espera-se desenvolver um diagnóstico multiplex que possa contribuir significativamente para a vigilância epidemiológica de arboviroses em Minas Gerais e no Brasil.

Bolsista: ANA CLARA PEREIRA DE MELO
Orientador(a): ALEX MEDEIROS KORNALEWSKI
Resumo: As taxonomias são somente uma forma de agrupar publicações relacionadas (ou outras partes do conteúdo). Por exemplo, o site do Observatório, poderá criar taxonomias para diferentes temáticas (cigarro eletrônico, tática RSC, etc.) e atribuir publicações relevantes a cada taxonomia. As taxonomias são úteis já que torna mais fácil para os leitores encontrar conteúdo relacionado (e fornecem também algum contexto ao seu conteúdo, apesar de essa ser uma vantagem secundária). A política taxonômica pode ser construída por intermédio de categorias facetadas, multifacetadas e ou tags. Aliás, existem algumas razões que justificam haver uma interface diferente para cada opção. Primeiro, cada publicação que você escreve precisa de uma categoria. As tags, por outro lado, são totalmente opcionais. As categorias são hierárquicas e as tags não. Hierarquia apenas significa que você pode adicionar subcategorias dentro de categorias-pai. Assim, pode colocar categorias dentro de outras, mas não para e fazer isso para tags. Quanto ao Observatório, a aplicação da política de taxonomia facetada é o indicado, visto que se adequa a interoperabilidade do software de gestão de conteúdo e documento utilizado pelo setor (plataforma Drupal).

Bolsista: EDUARDA FOIT VERA CRUZ
Orientador(a): ANDREZA PAIN MARCELINO
Resumo: Introdução: Trata-se de um estudo de validação de método para diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana-LTA por Ensaio Imunoenzimático-ELISA. O ELISA constitui método diagnóstico sorológico de fácil execução, baixo custo e muito utilizado na rotina diagnóstica de diversos agravos. A coleta de soro é um procedimento universalmente utilizado e o transporte e armazenamento de amostras sorológicas é bem estabelecido e regulado no Brasil. No entanto, não existe na Rede Pública de Saúde, até o momento, um método sorológico eficaz, em relação aos aspectos de acessibilidade, custo e desempenho, para o diagnóstico da LTA. O Laboratório de Pesquisa Clínica e Vigilância em Leishmanioses (LaPClinVigiLeish) do Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas (INI), Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz) possui experiência no atendimento de pacientes suspeitos de LTA, na assistência clínica como também laboratorial e utiliza esta técnica “in house”, com antígenos brutos (Abr) de Leishmania (Viannia) braziliensis para diagnóstico da LTA. Entretanto, este método necessita de padronização e validação para que possa ser descentralizado para outras unidades de atendimento laboratorial do país, principalmente porque a LTA não é uma doença que induza a produção de altos níveis de anticorpos. Adicionalmente, muitos pesquisadores investigam modelos antigênicos com proteínas sintéticas ou recombinantes, que possam apresentar vantagens não só em relação ao desempenho como também na facilidade de produção em larga escala. Neste contexto, a Universidade Federal de Minas Gerais desenvolveu uma proteína quimérica de epítopos de linfócitos B (QuLB), com resultados promissores, para uso em ELISA para diagnóstico da LTA. Sendo assim, este subprojeto consiste na etapa de avaliação dos dois protótipos de ELISA utilizando os dois princípios antigênicos distintos supracitados (Abr e QuLB), comparando o desempenho de cada um deles e elegendo o melhor modelo como proposta para produção de kits diagnósticos para LTA. Objetivo geral: avaliar os protótipos de kits para o diagnóstico sorológico da leishmaniose tegumentar americana, pelo método de ELISA. Objetivos específicos: Determinar os parâmetros de desempenho dos protótipos e realizar estudo de custo-efetividade. Metodologia: serão utilizadas 200 amostras de soro de pacientes positivos para LT, 200 amostras de soro de pacientes com esporotricose e 200 amostras de pacientes com doença de Chagas, todos atendidos no ambulatório do INI. Para determinar os parâmetros (pontos de corte) cut-off e faixa cinza será construída uma curva ROC (“receiver operating characteristic”) para estimativa da área sob a curva como medida de acurácia, e o estudo de custo efetividade será realizado pela estimação dos custos e análise de custo-minimização. Este projeto constitui parte do projeto principal intitulado: “Produção e avaliação de protótipo de Ensaio Imunoenzimático-ELISA para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana: comparação entre antígeno solúvel de L.(V.)braziliensis e proteína quimérica multiepitopo de linfócitos B, aprovado na II Chamada PROEP/PEC FIOCRUZ CNPQ 30/20, processo 20445949/2020-1.

Bolsista: YARA JULIA DOS SANTOS RANGEL
Orientador(a): OLINDO ASSIS MARTINS FILHO
Resumo: Caracterização do Problema: A febre amarela é uma doença infecciosa aguda febril causada por arbovírus de RNA da família Flaviviridae. Não há tratamento específico para a doença e a vacinação é a única medida eficaz para de controle. A vacina antiamarílica, disponível desde 1938, composta por vírus vivo atenuado de alta imunogenicidade, induz imunidade protetora em aproximadamente 95% de adultos primovacinados. Embora seja uma das vacinas mais seguras que se tem conhecimento, a ocorrência de eventos adversos graves pós-vacinação pode ser observada em alguns grupos de risco, destacando pacientes com doenças reumáticas inflamatórias imunomediadas (DIIM). Além do mais, considera essencial levar em consideração a eficácia vacinal nesses indivíduos. Nesse sentido, a identificação do status sorológico para a FA se constitui um grande desafio para a otimização e uso racional da vacina da febre amarela. Atualmente, o PRNT (teste de neutralização por redução de placas) é o teste de referência internacional para a definição do status sorológico vacinal para a vacina de FA. No entanto, essa metodologia apresenta uma série de limitações. Logo, a busca de novos testes capazes de definir o status vacinal antiamarílico de forma prática em laboratórios clínicos de rotina representa um desafio para a comunidade científico. Nesse contexto, a utilização do Microarranjo de Peptídeos VFA para a avaliação do status sorológico vacinal antiamarílico 17DD apresenta-se com a perspectiva de fornecer evidências científicas fundamentais que subsidiarão análises mais complexas e sofisticadas relacionadas ao repertório de reconhecimento por imunoglobulinas de indivíduos vacinados. Justificativa e objetivos: Diante do cenário epidemiológico atual de franca expansão da FA, a identificação acurada de falhas vacinais primária e secundária impactará diretamente no remodelamento do cenário atual de demanda por doses vacinais, um tópico de grande interesse para a OMS e para o Programa Nacional de Imunizações (PNI) do Brasil. Nesse sentido, este trabalho poderá fornecer resultados relevantes para subsidiar o planejamento vacinal em sua prática clínica em pacientes DIIM. Podendo dessa forma, se aplicar como uma ferramenta para monitoração da imunidade induzida pela vacina antiamarílica nesses pacientes visto as particularidades que cada doença de base pode implicar na resposta específica individual. Para tal, busca-se caracterizar o repertório de imunoglobulinas específicas após a primovacinação antiamarílica 17DD em pacientes DIIM. Síntese da Metodologia: Serão realizadas as seguintes avaliações: - Identificação e seleção das amostras de soro; - Realização dos imunoensaios empregando o Microarranjo de Peptídeo VFA; - Análise das imagens geradas; - Avaliar e caracterizar o repertório de imunoglobulinas em pacientes DIIM. Perspectivas: Identificando as vantagens da utilização de um microarranjo de peptídeos, torna-se de grande valor a realização de novas investigações sobre o perfil de reconhecimento de peptídeos em outras populações e em outros cenários. Nesse sentido, espera-se utilizar da metodologia proposta nesse estudo para melhor entender o repertório de peptídeos reconhecidos por indivíduos vacinados com 1/5 da dose padrão da vacina antiamarílica, bem como possíveis diferenças nos perfis de reconhecimento de adultos e crianças frente a vacinação para FA.

Bolsista: Yasmim Fernandes abreu
Orientador(a): ROMULO JOSE SOARES BEZERRA
Resumo: Os números ainda elevados de casos de Covid-19 no Brasil, considerado como o segundo país das Américas em incidência e mortalidade pela doença durante a pandemia, exige celeridade no desenvolvimento de estudos in vitro para avaliar a resposta imunológica, fatores de agravamento, tratamento, eficácia, efeitos colaterais de drogas antivirais, protótipos vacinais promissores e de cura. Com base nos mecanismos de ação de drogas antivirais, diversas abordagens terapêuticas têm sido propostas, com destaque para os inibidores da polimerase e os inibidores de protease. Entretanto, outras abordagens terapêuticas vêm sendo também avaliadas. Assim, o estabelecimento de tratamentos naturais, aprovados pelo FDA e em ensaios pré-clínicos como modelos in vitro, permitem maior agilidade na obtenção de resultados para o direcionamento de ensaios clínicos em humanos, chegando rapidamente à população. Neste contexto, o presente projeto tem como objetivo avaliar a resposta antiviral e imunomoduladora do composto fitoquímico Indol-3-carbinol (I3C), e dos compostos sintéticos Semicarbazona-ISAPROP e Semicarbazona-ISATINA, como uma nova abordagem de tratamento frente a infecção pelo SARSCoV-2, nos modelos in vitro, em células de linhagem HEPG2, Vero E6 e THP-1